產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種條件性致病菌，其主要毒力因子為外毒素，是引起家畜(牛、羊、兔)壞死性腸炎和腸毒血癥的病原體。
近日一篇發(fā)表于Vaccines期刊的文章中，研究人員以pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei(干酪乳桿菌為抗原遞送載體，表達(dá)產(chǎn)氣莢膜梭菌α，ε，β1和β2類毒素)為誘餌顆粒疫苗，隨后，用飼料原料將表達(dá)四價(jià)類毒素的重組益生菌制成誘餌顆粒，作為口服疫苗免疫，進(jìn)一步評價(jià)了α，β誘餌顆粒疫苗和ε天然外毒素口服免疫家兔的免疫原性和免疫保護(hù)效果。
研究人員首先以增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)為標(biāo)記篩選重組乳酸菌，結(jié)果表明，pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei細(xì)胞表面有明顯的綠色熒光，而pPG-T7g10/L.casei細(xì)胞表面無明顯的綠色熒光，表明EGFP呈結(jié)構(gòu)性表達(dá)。隨后，研究人員對重組質(zhì)粒pPG-α-β2-ε-β1在干酪乳桿菌中的片段穩(wěn)定性進(jìn)行了評價(jià)。結(jié)果表明，重組乳酸菌具有良好的穩(wěn)定性，沒有目的基因的丟失，也沒有任何結(jié)構(gòu)重排。
如何評價(jià)重組乳酸菌對消化環(huán)境的耐受性呢？研究人員進(jìn)行了重組干酪蛋白pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei對膽汁、高滲環(huán)境、模擬胃環(huán)境和腸液環(huán)境的耐受性試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，重組乳酸菌對極端消化環(huán)境具有一定的耐受性。在高滲環(huán)境(9%NaCl 5h)、0.5%膽鹽5h和模擬胃環(huán)境(pH1.5)3h的極端環(huán)境中，pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei的存活率分別保持在約50%、25%和25%。
淋巴細(xì)胞增殖與細(xì)胞免疫呈正相關(guān)。研究人員于初次免疫后第35天收集各組兔脾淋巴細(xì)胞，用純化的α，β-1、β-2或ε類毒素蛋白進(jìn)行二次刺激。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與pPG-T7g10/L.casei組和pBS組相比，口服含有pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei的誘餌顆粒疫苗的家兔有顯著的淋巴增殖作用。
為了評價(jià)誘餌顆粒疫苗對產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素的免疫保護(hù)作用，用產(chǎn)氣莢膜梭菌(A、C、D型毒素)與外毒素混合物聯(lián)合攻擊家兔，攻擊試驗(yàn)表明，誘餌顆粒疫苗對家兔產(chǎn)生的產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素具有較好的免疫保護(hù)作用。口服誘餌顆粒疫苗的家兔存活率為80%，肌肉注射商品滅活產(chǎn)氣莢膜弧菌疫苗的存活率為60%，而pPG-T7g10/L.casei組和PBS組全部死亡。
綜上所述，用組成性表達(dá)α，ε，β-1和β-2類毒素的重組乳酸菌制備的口服誘餌顆粒疫苗能有效誘導(dǎo)抗原特異性的粘膜和體液免疫應(yīng)答，可防止注射壓力，這表明該誘餌益生菌疫苗是一種很有前途的產(chǎn)氣莢膜梭菌疫苗接種策略。
