一、細胞培養條件
細胞英文名稱:CAM191
細胞中文名稱:EBV-轉化人淋巴細胞
形態特性:淋巴母細胞樣
生長特性:懸浮
培養體系:1640+10%FBS
傳代方法:傳代情況
凍存條件:細胞庫無血清凍存液
二、細胞收到后處理
細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最
好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精噴灑整個瓶
消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過 80%匯合度時，可將瓶
裝的完全培養液移入廢液缸中，懸浮細胞需離心處理，加入 6ml 新鮮完全培養基，
放入 37℃、5%CO2 孵箱培養；超過 80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體
操作見細胞培養步驟。
三、細胞培養步驟
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入
5mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL
培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入
6cm 皿中，加入約 6ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL
培養液后吹勻，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿
中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸
液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄
去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM 條件下離
心 8-10 分鐘，去除上清，按凍存數量加入細胞庫推薦的無血清凍存液。
PS：若客戶收到 2ml 小管細胞，收到細胞后，用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放
到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至 T25 培養瓶或 6cm 培
養皿，加入 5ml 左右完全培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若
密度未超過 80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%，可直
接進行傳代（方法同上）。
