細(xì)胞名稱   Mcf-7/ADR；人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

生長(zhǎng)特性   貼壁

培養(yǎng)條件   RPMI-1640+10%FBS+1%P/S+500ng/mlADR

培養(yǎng)環(huán)境   37℃   5% CO2，,95% AIR

傳代比例   1:2 傳代，2~3 天換液

凍存條件   90%FBS+10%DMSO

QC 檢測(cè)    支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性 

1、細(xì)胞傳代： 

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次； 

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng) 液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min； 

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 

2、細(xì)胞凍存： 

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次； 

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終 止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min； 

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中； 

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序 降溫盒可直接放入-80℃。  

3、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié) 晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁； 2）將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min； 

3）棄上清，沉淀用 6ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；