細胞描述
該細胞為正常的二倍體細胞，不具備無限增殖的能力。建議用戶收到細胞后，在細胞倍增
5~8 次內(nèi)完成實驗。
細胞特性
1） 來源：小腸
2） 形態(tài)：上皮樣
3） 含量：>1x106
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到
后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)
生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
收到細胞后請拍照，3 天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細
胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4 或 5X 物鏡)下進行，能
準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在 10X 和 20×物鏡下，同時給剛收
到的細胞拍照，（10×，20×）各 2-3 張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細
胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）觀察好細胞狀態(tài)后，
75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落
或者脫落后抱團生長，可將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h，然后抽出瓶中
的培養(yǎng)基和未貼壁細胞 1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照
說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置約 2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和
細胞 1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說
明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備 Hybri-Care Medium (ATCC, 46-X)培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；
rhEGF（Sigma, SRP 3027-500μg）30 ng/ml；雙抗，1%；
培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱
濕度為 70%-80%。
2）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1） 復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加
入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補
加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?
細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并
檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培
養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部
分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止
消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分
鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者
瓶中。
注：第一次傳代推薦傳代比例為 1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面 T25 瓶為類；
1，細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓
脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加
入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于 1x106/ml，每
支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 個小時以后轉(zhuǎn)入
液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立
即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注
意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
