| 產(chǎn)品名稱 |
PA317（PA-317） |
| 商品貨號 |
MZ-0143 |
| 中文名稱 |
小鼠胚胎成纖維細胞 |
| 細胞數(shù)量 |
1*10^6 |
| 組織來源 |
胚胎；成纖維細胞；NIH Swiss |
| 細胞種屬 |
mus musculus, mouse |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 生長特性 |
adherent |
| 培養(yǎng)基 |
DMEM+10% FBS+1% P/S |
| 形態(tài)特征 |
fibroblast |
| 傳代方法 |
1:4-1:8 |
| 細胞描述 |
PA317細胞株源自TK-NIH/3T3細胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細胞，結(jié)果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。這株細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟悺？赡芤驗橛糜跇?gòu)建這株細胞而轉(zhuǎn)入的DNA丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細胞百分比隨傳代而減少。在包含0.03mM次黃嘌呤,0.001mM氨甲喋呤和0.02mM胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中 |
| 復(fù)蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞凍存步驟 |
：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 細胞凍存 |
Freeze medium: 50% basal medium+40% FBS+10%.DMSOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
| 細胞運輸 |
干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸（T25細胞瓶） |
