| 產(chǎn)品名稱 |
RWPE-1 |
| 商品貨號 |
MZ-0323 |
| 中文名稱 |
人前列腺上皮細(xì)胞 |
| 規(guī)格 |
T25 |
| 組織來源 |
前列腺上皮；HPV18轉(zhuǎn)化；男性 |
| 形態(tài)特征 |
上皮細(xì)胞 |
| 生長特性 |
貼壁生長 |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 特征特性 |
腫瘤抑制基因： p53 + [PubMed: 9214605] pRB + [PubMed: 9214605] 一位正常男性前列腺組織切片的周圍區(qū)域的上皮細(xì)胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒的18(HPV-18)進行轉(zhuǎn)化，建立了RWPE-1 (ATCC CRL-11609) 細(xì)胞株 [PubMed: 9214605]. 在三維Matrigel培養(yǎng)時，在雄激素作用下，RWPE-1細(xì)胞形成腺胞并向培養(yǎng)基中分泌PSA。[PubMed: 11170142]. 當(dāng)與Matrigel或基質(zhì)細(xì)胞混合注射雄性裸鼠時，RWPE-1細(xì)胞也能形成腺胞[PubMed: 11304724] 并產(chǎn)生PSA。 來源于RWPE-1的細(xì)胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉(zhuǎn)染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細(xì)胞株(ATCC CRL-11610) [PubMed: 9214605] 和 RWPE2-W99 (ATCC CRL-2853) 細(xì)胞株。 另外，用N-甲醇-N-硝基脲(MNU)處理RWPE-1，建立了一系列模擬前列腺癌進程中不同時期的成瘤細(xì)胞株。 它們是 WPE1-NA22 (ATCC CRL-2849), WPE1-NB14 (ATCC CRL-2850, WPE1-NB11 (ATCC CRL-2851) 和 WPE1-NB26 (ATCC CRL-2852) 細(xì)胞株。 據(jù)提供者報道，RWPE-1 細(xì)胞株(ATCC CRL-11609)經(jīng)過檢測，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
基本培養(yǎng)基作為Invitrogen (GIBCO)提供的kit的部分： 角化細(xì)胞無血清培養(yǎng)基K-SFM，kit目錄號17005-042。隨kit提供這株細(xì)胞生長所需的兩種添加劑（牛垂體提取物BPE及人重組表皮生長因子EGF）。 配制完全生長培養(yǎng)基，需添加以下成分： 0.05 mg/ml BPE – 隨K-SFM提供 5 ng/ml EGF -隨K-SFM提供。 注意： 不要過濾完全培養(yǎng)基。 氣相： 空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度： 37.0°C。或者KM專用培養(yǎng)基 |
| 傳代方法 |
1:3傳代,2-3天傳一代。 |
| 凍存條件 |
無血清細(xì)胞凍存液 |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 細(xì)胞復(fù)蘇步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
