明舟生物KGN介紹

一．產品簡介

1、細胞名稱：人卵巢顆粒細胞；KGN

 2、生長特性：    R 貼壁   □ 懸浮   □懸浮+貼壁

3、細胞生長條件：

培養條件         DMEM/F-12+10%FBS+1%雙抗

溫度           37℃

空氣條件       5% CO2,95% AIR

傳代方法生長緩慢建議1:2傳代，2~3天換液

凍存條件90%FBS+10%DMSO

4、背景資料：該細胞株是顆粒細胞瘤。細胞在加入人體絨膜促性腺激素后可能產生孕酮。細胞生長緩慢。

4、圖片：

二．使用方法

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作

取出25cm²培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮完全培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm²培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml完全培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO₂細胞培養箱中培養；

4）待細胞完全貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm²培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種25cm²培養瓶，于37℃，5%CO₂細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。