細胞培養說明書

細胞名稱 HEp-2;人喉表皮樣癌細胞
生長特性 貼壁
培養條件   MEM+10%FBS+1%P/S
培養環境   37℃   5% CO2，,95% AIR
傳代比例 1:2傳代，2~3天換液
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
QC檢測 支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

1、人喉表皮樣癌細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm²培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用1-2ml完全培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO₂細胞培養箱中培養；

2、人喉表皮樣癌細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm²培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

3、人喉表皮樣癌細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含6ml完全培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用6ml完全培養基重懸，接種25cm²培養瓶，于37℃，5%CO₂細胞培養箱中培養；